Page 247 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2022年第5期

第 5 期 孙鑫 等：农药胁迫对小白菜营养品质的影响及农药残留的去除方法研究
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1）小白菜（Brassica chinensis L.）种子购自江苏
宿迁景趣园艺店，种植在温度适宜、光照充足的室外
盆装土壤中。将每株长有 3~4 片叶子的幼苗从盆中
取出，转移到盛有营养土的种植箱中继续栽培，1~2
周后开始喷洒农药，开展试验。
2）主要试剂。乙腈、甲醇、丙酮购自国药集团化
学试剂有限公司，均为分析纯。试验用水均为超纯
水。市售农药百菌清（75% 可湿性粉剂）购自浙江威
尔达化工有限公司，百菌清标准品（99%）和氟虫腈
标准品（99%）购自上海源叶生物科技有限公司。毒
死蜱标准品（99%）购于上海阿拉丁生化科技股份有
限公司。按照使用说明配制相应浓度的混合农药溶
液，用于小白菜施药。
1.2 仪器与设备
GC-8850 型气相色谱仪器（电子捕获检测器，
ECD），山东鲁南瑞虹化工有限公司；GC-8850 系列
气相色谱工作站，浙江大学智达信息工程有限公司；
SE-54毛细管柱（30 m × 0.32 mm × 0.25 μm），兰州
中科安泰分析科技有限公司；CT-1 型氮氢空气发生
器，武汉科林普丰仪器有限公司；自制 SPME 手柄。
58 μm 甲基丙烯酸-二乙烯基苯-N-乙烯基吡咯烷酮介
孔分子筛萃取头（methacrylic acid-divinylbenzene-N-
vinyl pyrrolirodone mesoporous molecular sieve，MAA
-co-DVB-co-NVP@ MCM-41）参考文献［7］制备。
以高纯氮气为载气，流速1.0 mL/min，空气0. 095
MPa，氢气 0.065 MPa，尾吹气 0.075 MPa，分流进样，
分流比为 4∶1，电流 0.5 nA。柱温：初始温度 100 ℃，
以 20 ℃/min 升 温 至 180 ℃ ，以 10 ℃/min 升 温 至
240 ℃，5 ℃/min 升至 260 ℃，保持 10 min，程序结束。
进样口温度280 ℃，ECD检测器温度290 ℃。
1.3 试验方法
1）小白菜施药。市售农用百菌清农药（75% 可
湿性粉剂）按照1∶4 000的比例兑水配制溶液，毒死蜱
和氟虫腈使用标准品配制成质量浓度为50 μg/mL 的
溶液，用于小白菜施药。每次施药从上、下、前、后、 1.5
左、右对小白菜表面进行喷洒，尽量均匀分布。
2）直接 SPME 操作。在 10 g 小白菜匀浆中添加
50 µL农药混标（百菌清0.5 mg/mL、毒死蜱1 mg/mL、 农药作为空白对照组。施药溶液为百菌清、毒死蜱
氟虫腈 1 mg/mL），磁力搅拌 15 min混匀，4 ℃冰箱放
置 12 h。取 10 g 配制好的加标匀浆分装至 10 mL 萃
241
取瓶中，加入磁子，盖紧瓶盖。在 1 200 r/min 的搅拌
速度下萃取60 min。萃取完成后，取出萃取头于超纯
水中快速漂洗 5 s，然后于 280 ℃的 GC 进样口解吸
10 min，解吸完毕后以甲醇-丙酮（体积比 1∶1）混合溶
剂洗涤萃取头 1 min，再使用无尘纸擦拭。将萃取头
在280 ℃解吸5 min，继续分析下一个样品。
3）营养指标的测定。水分含量的测定：先测定
小白菜的鲜质量，将样品切碎后放入称量瓶，在恒温
干燥箱内 105 ℃杀青 30 min，75 ℃烘干至恒质量，用
万分之一天平称量其干质量。
还原糖含量的测定采用 3，5-二硝基水杨酸法；
可溶性蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法，参考
SN/T 3926-2014《出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含
量的测定 考马斯亮蓝法》；维生素 C 含量采用 2，6-二
氯靛酚滴定法测定，参考 GB 5009.86-2016《食品安
全国家标准 食品中抗坏血酸的测定》；类胡萝卜素含
量的测定采用纸层析法，参考 GB/T 5009.83-2003
《食品中胡萝卜素的测定》；粗纤维含量采用重量法
测定，参考 GB/T 5009.10-2003《植物类食品中粗纤
维的测定》；矿质元素的测定：采用湿法消化法进行
样品预处理，钙含量采用 EDTA 滴定法测定，磷含量
［8］
采用钼蓝比色法测定 。
1.4 直接SPME/GC方法建立与评价
采用外标法定量。分别配制 6组农药混标，质量
浓度分别为 0.001、0.005、0.010、0.050、0.100 和 1.000
μg/mL。分别取 10 µL 不同质量浓度的混标至 10 g
小白菜浆中，建立定量标准曲线，其中，0.05 μg/g 的
样品平行测定 5 次计算相对标准偏差（RSD）。根据
3δ/S（δ为样品空白响应值的标准偏差，S为校正曲线
［9］
的 斜 率）求 得 方 法 的 检 出 限（LOD） 。 定 量 限
（LOQ）为线性范围内的最低添加水平。
采用外加标准品法计算 DI-SPME/GC 方法的
回收率。在空白小白菜浆中分别添加各农药线性范
围内低、中、高 3 个水平的混标，在最优的萃取条件
下，重复测定 3次。将峰面积代入标准曲线得出农药
质量浓度，求平均值并计算RSD和加标回收率。
试验组设计
选取 4 组长势相似的小白菜，其中 3 组施药质量
浓度从高到低依次为 100、50、1 μg/mL，1 组不施加
和氟虫腈 3种农药的混合溶液。施药 7 d后将小白菜
采摘带回实验室，进行营养成分的测定。