Page 204 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2022年第5期

第41卷 第5期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vol.41 No.5
2022年 9月 Journal of Huazhong Agricultural University Sep. 2022，198~205

垫料）。每天随机选择 1~2 种应激，连续 3 d 应激类 工程研究所）测定血清中总胆固醇（total cholesterol，
陈平，李晓芳，余颖，等.不同饮食模式对CUMS诱导的小鼠焦虑抑郁样行为的影响［J］.华中农业大学学报，2022，41（5）：198⁃205.
DOI：10.13300/j.cnki.hnlkxb.2022.05.024 型不重复。 TC）、甘 油 三 酯（triglyceride，TG）含 量 ；按 照 相 应
1.3 糖水偏好试验 ELISA 试剂盒（DB1296-Mu，DB459-Mu，上海沪鼎
不同饮食模式对CUMS诱导的小鼠 测试之前，小鼠自由饮食 24 h，保持小鼠能自由 生物科技有限公司）操作手册，测定血清和海马体中
饮用2瓶不同的水，其中一瓶为蒸馏水，另一瓶为1% 的 5-羟色胺（serotonin，5-HT）和去甲肾上腺素（nor⁃
焦虑抑郁样行为的影响 的蔗糖水。为了防止小鼠对糖水位置有偏爱，在此 epinephrine，NE）含量。组织样本预处理方法如下：

期间，每隔 12 h 对调蒸馏水瓶和蔗糖水瓶的位置。 称取海马体组织，每 10 mg 组织加入 100 μⅬ的 RIPA
陈平 ，李晓芳 ，余颖 ，张颖莹 ，张家明 ，李春美 ，李凯凯 1，2 此训练结束后，小鼠禁食禁水12 h，蔗糖水瓶和蒸馏水 （RIPA∶PMSF=100∶1），在冰上裂解 30~40 min，然
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1，2
瓶称质量后放到鼠笼上，给予小鼠自由饮水6 h，然后称
1.华中农业大学食品科学技术学院，武汉 430070；2.华中农业大学环境食品学教育部重点实验室，武汉 430070 后于 12 000 r/min 4 ℃离心 10 min，小心吸取上清，进
量2个水瓶质量。根据以下公式计算糖水偏好率：糖
行测定。
水偏好率=（糖水消耗量/总液体消耗量）×100%。
摘要 为探究不同饮食模式对小鼠焦虑抑郁样行为的影响，采用慢性不可预见性温和应激（chronic unpre⁃ 1.9 数据分析
1.4 旷场试验
dictability mild stress，CUMS）模型，将 C57BL/6 小鼠随机分为正常饮食组（normal diet，ND）、正常饮食应激组 数 据 使 用 GraphPad Prism version 8 和 SPSS
小鼠单独放入敞箱（50 cm×50 cm×40 cm）的中
（normal diet stress，NDS）、高脂饮食组（high fat diet，HFD）和高脂饮食应激组（high fat diet stress，HFDS），对小 25.0 进行统计，分别使用 Shapiro-Wilk 检验和单因素
央格中，自由探索 5 min。用视频跟踪系统记录小鼠
鼠的行为、体质量、脂质和神经递质等指标进行测定。结果显示，与ND组相比，HFD组小鼠糖水偏好显著降低， 变量方差分析（ANOVA）检验进行正态性和方差齐
旷场试验中总运动距离、进入中心区域次数和跨格次数降低，HFDS 组部分行为学指标较 HFD 组更低，且 的运动距离、进入中心区域次数、支撑性站立次数等 性检验，数据以“平均值±标准差”表示，当 P<0.05
HFDS 组部分行为学指标低于 NDS 组；HFD 组体质量、体脂比、总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平最高， 指标。每次试验结束后，用 75% 的乙醇清洗试验 时，判定数据间有显著性差异。
CUMS 显著降低高脂饮食和正常饮食小鼠的体脂比、TC 和 TG 水平，且与 NDS 组相比，这些脂质指标水平在 区域。
HFDS 组更低。结果表明，高脂饮食易诱导焦虑抑郁样行为，且高脂饮食会加重 CUMS 诱导的焦虑抑郁样行 1.5 明暗箱试验 2 结果与分析
为，其机制可能与脂质代谢、中枢神经递质代谢途径有关。 该测试装置为 1 个（42 cm×21 cm×25 cm）盒
2.1 不同饮食模式下 CUMS 应激小鼠的糖水偏好
关键词 慢性不可预见性温和应激（（CUMS））；饮食模式；行为；焦虑抑郁；脂质；神经递质 子，盒内分为小（1/3）暗室和大（2/3）亮室，1 个 3 cm
中图分类号 R749.4 文献标识码 A 文章编号 1000-2421（2022）05-0198-08 高、4 cm宽的受限开口连接 2个腔室。小鼠单个放置 情况
在有照明的隔间里，并可在 2 个隔间之间自由移动。 如 图 1 所 示 ，饲 喂 高 脂 饲 料 的 小 鼠（HFD，
慢性压力是一个普遍存在的社会健康问题 ［1-2］ ， 1 材料与方法 用视频跟踪系统记录 5 min 内小鼠在光室和暗室的 HFDS）总液体消耗量显著低于饲喂正常饲料的小鼠
［3］
会增加神经精神疾病 和一些其他慢性疾病（如功能 停留时间及穿梭次数。试验结束时，及时清理小鼠 （ND，NDS）。与 ND 组相比，HFD 组总液体消耗量
1.1 实验动物和分组 的排泄物。 和糖水偏好率显著降低。且联合 CUMS 干预后，饲
［4］
性胃肠道疾病）的发生率 。有数据显示，目前全球
雄性 C57BL/6 小鼠购于湖北省疾控中心，共 40 1.6 高架十字迷宫试验 喂高脂饲料小鼠（HFDS）的糖水偏好率更低。这些
近 3亿人承受慢性压力带来的健康困扰，并且其危害
只，体质量为（20±2）g。饲养环境为 12 h 的明暗循 高架迷宫装置的主体部分由大小相同的 2 个张 数据表明，高脂饮食更易诱导抑郁样行为，且联合
［5］
程度还在不断扩大 。同时，不同机体对慢性压力的
环，温度为 24~26 ℃，湿度为 60% 相对湿度，通风良 开的臂和 2 个闭合的臂（5 cm×15 cm×35 cm）组成。 CUMS会加重这种异样行为。虽然NDS组和HFDS
响应不同，例如肥胖和糖尿病会导致神经和情绪障
好，小鼠自由进食饲料和水。适应性饲养 1 周后，随 1个中央开放区域（5 cm × 5 cm）连接 4个手臂，让小 组蔗糖偏好率没有差异，但是 HFDS 组的总液体消
碍的风险增加，包括认知能力下降、抑郁、焦虑和痴
机分为对照组的正常饮食组（normal diet，ND）、高脂 鼠自由地进入每个臂。小鼠被单独地放在中央区 耗量显著低于 NDS 组，说明 HFDS 组的蔗糖水消耗
呆的发病率增加等 ［6-8］ 。而且，由于焦虑抑郁情绪导 域，面对张开的臂，自由探索 5 min，视频跟踪系统将
饮食组（high fat diet，HFD）和应激组的正常饮食应 量低于 NDS组。糖水偏好试验结果表明高脂饮食会
致的社会功能下降，同时伴随着不健康饮食和缺乏 小鼠在迷宫中的活动记录下来。为避免前一只小鼠
激组（normal diet stress，NDS）、高脂饮食应激组（high 加重CUMS诱导的抑郁样行为。
运动 ［9-10］ ，精神障碍等慢性疾病患者的肥胖发生率也 fat diet stress，HFDS），每 组 各 10 只 ，饲 养 12 周 。 的气味干扰，后一只小鼠测试前，用 75% 的乙醇清洗 2.2 不同饮食模式下CUMS应激小鼠旷场行为
高于正常人群 ［11］ 。然而到目前为止，不同膳食模式 ND、NDS 喂食基础饲料，HFD、HFDS 喂食高脂饲 除掉小鼠的尿液和粪便。 如图 2 所示，从运动轨迹图（图 2A）可以看出，与
对慢性压力诱导的焦虑和抑郁等的影响尚不清楚。 料（D12492，睿迪生物科技（深圳）有限公司）。NDS 1.7 组织收集 正常饮食组（ND）相比，高脂饮食组（HFD）和 CUMS
本研究通过建立高脂饮食联合慢性不可预见性温和 和 HFDS 给予慢性不可预测温和应激，共 12 周。 小鼠处死前，对其禁食但不禁水 12 h。采用摘除 组（NDS，HFDS）的小鼠更倾向于在周边区域运动。
应激（chronic unpredictability mild stress，CUMS）小鼠 1.2 慢性不可预测温和应激（CUMS）方法 眼球取血的方式取血后，立即颈椎脱臼处死小鼠，打 而且，高脂饮食组和 CUMS 组小鼠在旷场中运动的
开头颅取脑，并在冰上剥离海马体。打开腹腔，取出
模型，探究小鼠行为、脂质指标和神经递质水平在正 参照Carter等 ［12］ 的应激方法，经改良后建立本试 肾周脂肪组织、附睾脂肪组织、腹股沟脂肪组织等， 总距离、进入中心区域次数和跨格次数显著低于正
常饮食模式和高脂饮食模式中的差异，旨在阐明不同 验的应激方法。应激类型包括禁食 24 h、禁水 24 h、 称脂肪组织的质量。全血室温静置 30 min 后，1 300 常饮食组。表明高脂饮食和 CUMS 会显著降低小鼠
饮食模式对 CUMS 诱导的小鼠焦虑抑郁样行为形成 45 °鼠笼倾斜 24 h、潮湿垫料 24 h、水平振荡 5 min、悬 r/min 4 ℃离心 15 min，用移液枪小心吸取上层血清 的运动能力和探索能力。虽然 NDS和 HFDS组小鼠
的影响。 尾 3 min、45 ℃烘箱 5 min、光刺激、空笼 24 h（不放置 于干净 EP 管中备用，用于后续脂质指标及神经递质 的旷场行为指标没有显著差异，但是相较 HFD 组，
含量的测定。血清和海马体样本及时放在-80 ℃冰 HFDS组小鼠的运动轨迹更集中于周边区域，且探索
收稿日期：2022-05-09 箱中保存。 和运动能力较弱。矿场试验结果表明，不同饮食模
基金项目：华中农业大学自主科技创新基金项目（2662020SPPY004）
1.8 理化指标检测 式下，小鼠的运动轨迹表现出明显差异，高脂饮食会
陈平，E-mail：PingChen980108@webmail.hzau.edu.cn
通信作者：李凯凯，E-mail：likaikai@mail.hzau.edu.cn 使用试剂盒（A111-1-1，A110-1-1，南京建成生物 加重CUMS应激小鼠的探索运动能力的减少。