Page 205 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2022年第5期
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第 5 期                陈平 等：不同饮食模式对 CUMS 诱导的小鼠焦虑抑郁样行为的影响                                    199

               垫料）。每天随机选择 1~2 种应激，连续 3 d 应激类                    工程研究所）测定血清中总胆固醇（total cholesterol，
               型不重复。                                            TC）、甘 油 三 酯（triglyceride，TG）含 量 ；按 照 相 应
               1.3  糖水偏好试验                                      ELISA 试剂盒（DB1296-Mu，DB459-Mu，上海沪鼎
                   测试之前，小鼠自由饮食 24 h，保持小鼠能自由                     生物科技有限公司）操作手册，测定血清和海马体中
               饮用2瓶不同的水，其中一瓶为蒸馏水，另一瓶为1%                         的 5-羟色胺（serotonin，5-HT）和去甲肾上腺素（nor⁃
               的蔗糖水。为了防止小鼠对糖水位置有偏爱，在此                           epinephrine，NE）含量。组织样本预处理方法如下：
               期间，每隔 12 h 对调蒸馏水瓶和蔗糖水瓶的位置。
                                                                称取海马体组织，每 10 mg 组织加入 100 μⅬ的 RIPA
               此训练结束后，小鼠禁食禁水12 h，蔗糖水瓶和蒸馏水                      （RIPA∶PMSF=100∶1），在冰上裂解 30~40 min，然
               瓶称质量后放到鼠笼上，给予小鼠自由饮水6 h，然后称                       后于 12 000 r/min 4 ℃离心 10 min，小心吸取上清，进
               量2个水瓶质量。根据以下公式计算糖水偏好率：糖
                                                                行测定。
               水偏好率=（糖水消耗量/总液体消耗量）×100%。                        1.9  数据分析
               1.4  旷场试验
                                                                    数 据 使 用 GraphPad Prism version 8 和 SPSS
                   小鼠单独放入敞箱（50 cm×50 cm×40 cm）的中
                                                                25.0 进行统计，分别使用 Shapiro-Wilk 检验和单因素
               央格中，自由探索 5 min。用视频跟踪系统记录小鼠
                                                                变量方差分析（ANOVA）检验进行正态性和方差齐
               的运动距离、进入中心区域次数、支撑性站立次数等
               指标。每次试验结束后，用 75% 的乙醇清洗试验                         性检验，数据以“平均值±标准差”表示，当 P<0.05
                                                                时，判定数据间有显著性差异。
               区域。
               1.5  明暗箱试验                                       2   结果与分析
                   该测试装置为 1 个（42 cm×21 cm×25 cm）盒
                                                                2.1  不同饮食模式下 CUMS 应激小鼠的糖水偏好
               子，盒内分为小（1/3）暗室和大（2/3）亮室，1 个 3 cm
               高、4 cm宽的受限开口连接 2个腔室。小鼠单个放置                       情况
               在有照明的隔间里，并可在 2 个隔间之间自由移动。                            如 图 1 所 示 ，饲 喂 高 脂 饲 料 的 小 鼠（HFD，
               用视频跟踪系统记录 5 min 内小鼠在光室和暗室的                       HFDS）总液体消耗量显著低于饲喂正常饲料的小鼠
               停留时间及穿梭次数。试验结束时，及时清理小鼠 （ND，NDS）。与 ND 组相比，HFD 组总液体消耗量
               的排泄物。                                            和糖水偏好率显著降低。且联合 CUMS 干预后，饲
               1.6  高架十字迷宫试验                                    喂高脂饲料小鼠（HFDS）的糖水偏好率更低。这些
                   高架迷宫装置的主体部分由大小相同的 2 个张                       数据表明，高脂饮食更易诱导抑郁样行为，且联合
               开的臂和 2 个闭合的臂（5 cm×15 cm×35 cm）组成。                CUMS会加重这种异样行为。虽然NDS组和HFDS
               1个中央开放区域（5 cm × 5 cm）连接 4个手臂，让小                  组蔗糖偏好率没有差异，但是 HFDS 组的总液体消
               鼠自由地进入每个臂。小鼠被单独地放在中央区                            耗量显著低于 NDS 组，说明 HFDS 组的蔗糖水消耗
               域，面对张开的臂，自由探索 5 min，视频跟踪系统将
                                                                量低于 NDS组。糖水偏好试验结果表明高脂饮食会
               小鼠在迷宫中的活动记录下来。为避免前一只小鼠
                                                                加重CUMS诱导的抑郁样行为。
               的气味干扰，后一只小鼠测试前，用 75% 的乙醇清洗                       2.2  不同饮食模式下CUMS应激小鼠旷场行为
               除掉小鼠的尿液和粪便。                                          如图 2 所示，从运动轨迹图（图 2A）可以看出，与
               1.7  组织收集
                                                                正常饮食组（ND）相比，高脂饮食组（HFD）和 CUMS
                   小鼠处死前，对其禁食但不禁水 12 h。采用摘除
                                                                组（NDS，HFDS）的小鼠更倾向于在周边区域运动。
               眼球取血的方式取血后，立即颈椎脱臼处死小鼠，打
                                                                而且，高脂饮食组和 CUMS 组小鼠在旷场中运动的
               开头颅取脑，并在冰上剥离海马体。打开腹腔，取出
                                                                总距离、进入中心区域次数和跨格次数显著低于正
               肾周脂肪组织、附睾脂肪组织、腹股沟脂肪组织等，
                                                                常饮食组。表明高脂饮食和 CUMS 会显著降低小鼠
               称脂肪组织的质量。全血室温静置 30 min 后，1 300
               r/min 4 ℃离心 15 min，用移液枪小心吸取上层血清                  的运动能力和探索能力。虽然 NDS和 HFDS组小鼠
               于干净 EP 管中备用，用于后续脂质指标及神经递质                        的旷场行为指标没有显著差异，但是相较 HFD 组，
               含量的测定。血清和海马体样本及时放在-80 ℃冰                         HFDS组小鼠的运动轨迹更集中于周边区域，且探索
               箱中保存。                                            和运动能力较弱。矿场试验结果表明，不同饮食模
               1.8  理化指标检测                                      式下，小鼠的运动轨迹表现出明显差异，高脂饮食会
                   使用试剂盒（A111-1-1，A110-1-1，南京建成生物               加重CUMS应激小鼠的探索运动能力的减少。
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