Page 280 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2022年第5期

274 华 中 农 业 大 学 学 报 第 41 卷

种便携式、集成化的化学发光信号检测装置，旨在 （CH297-01）及其软件模块购自北京滨松光子技术有
为谷物中 DON 的高灵敏现场快速检测提供新的 限公司。傅里叶变换红外光谱仪（Nicolet iS5）购自
思路。 美国赛默飞公司；扫描电子显微镜（FIB-910）购自德
国蔡司公司；原子力显微镜（Alphacen 300）购自瑞士
1 材料与方法
纳瑟公司；酶联免疫光谱分析仪（AQT90 FLES）购
1.1 化学试剂 自丹麦雷度公司；液相色谱-质谱联用分析仪（Van⁃
呕吐毒素（DON）、鼠源呕吐毒素抗体（DON- quish Core）购自美国赛默飞公司。

Ab，3 mg/mL）、呕吐毒素完全抗原（DON-BSA，3.5 1.3 检测原理
mg/mL）购自山东蓝都生物科技有限公司。HRP 标 由化学发光光纤免疫传感器原理图（图 1）可见，
山羊抗小鼠 IgG（1 mg/mL）购自上海碧云天生物技 光纤纤芯通过硅烷化试剂（APTES）和戊二醛（GA）
术有限公司。吐温-20、甲苯、戊二醛（GA）、牛血清白 与一定浓度呕吐毒素完全抗原（DON-BSA）进行共
蛋白（BSA）、氢氟酸（质量分数 48%）、N，N-二甲基 价偶联，制备得到可用于免疫反应检测的光纤探针。
甲酰胺（DMF）、3-氨基丙基三乙氧基硅烷（APTES） 将光纤传感区域浸入含有样品和鼠源 DON 抗体
购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司。Lumi⁃ （DON-Ab）的 混 合 溶 液 中 ，当 样 品 中 含 有 目 标 物
gen SPARCL™化学发光试剂盒购自广州市进德生 DON 时，光纤上固定的 DON-BSA 与溶液中 DON 竞
物科技有限公司。 争性地结合DON-Ab，DON浓度越大，固定在光纤上
磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）和磷酸盐吐温缓冲 的 DON-Ab 浓度越小，加入 HRP 酶标山羊抗小鼠
溶液（PBST 含 0.05% 吐温-20）均用美国 Millipore 公 IgG 后，光纤上捕获的 HRP 酶越少，其与触发剂接触
司的离子交换装置产生的去离子水制备。使用的其 后，HRP 酶催化发光底物吖啶酯从基态跃迁到激发
他普通化学品和试剂均为分析级，购自中国国药集 态，当其回到基态时产生一个较弱的化学发光信号；
团。大米、小麦、玉米样品由中国检验检疫科学研究 相反，当样品中没有目标物时，抗体仅与化学发光光
院提供。 纤传感器上固定的DON-BSA形成免疫复合物，加入
石 英 光 纤（SFS400/440/700T Superguide UV- HRP 酶标山羊抗小鼠 IgG 后，光纤上捕获的 HRP 酶
Vis）购自上海闻奕光电科技有限公司，数值孔径 浓度较大，加入过氧化脲触发剂后，产生一个较强的
（NA）为0.22，光纤纤芯直径400 μm。 化学发光信号，其强度与目标物 DON 浓度呈负相
1.2 试验设备 关，进而通过计算化学发光信号强度的差值（ΔCL）
光 子 计 数 探 测 器（CH326）、光 子 计 数 单 元 可以间接实现对目标物的定量分析。

图1 化学发光光纤免疫传感器检测呕吐毒素原理图
Fig.1 Schematic diagram of chemiluminescent fiber optic immunosensor for detection of DON
1.4 化学发光光纤探针的制备和免疫检测方法 保护壳。然后将光纤浸入 24% 氢氟酸中 30 min，以
1）化学发光光纤探针的制备。首先将光纤切成 去除光纤表面包层。用 0.1 mol/L NaOH 中和氢氟
6 cm 的小段，用小刀刮去前端约为 0.5 cm 的亚克力 酸，并用超纯水洗净后氮气吹干。将光纤浸泡在 0.1