Page 179 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2022年第5期

第 5 期 闫佳兴 等：石金钱龟板来源的寡肽与环氧合酶-2 相互作用机制 173

表1 不同温度下KNGP对COX-2的猝灭常数
Table 1 Quenching constants of KNGP on
COX-2 at three temperatures

12
4
T/K K q /[×10 L/(mol∙s)] K sv /(×10 L/mol) R 2
298 2.03 4.51 0.976 9
304 3.08 2.03 0.984 8
310 0.98 0.98 0.966 1

图 4 KNGP与COX-2的双对数回归曲线
Fig.4 The plots for calculating the binding constants
图 5 KNGP对COX-2的同步荧光光谱
and the number of binding sites of KNGP to COX-2
Fig.5 Synchronous fluorescence spectra
表2 不同温度KNGP对COX-2的结合常数和结合位点数 of COX-2 with KNGP
Table 2 Binding constant and binding number of KNGP 样地表明色氨酸残基所处微环境的疏水性增强，极
on COX-2 at three temperatures
性减弱。酪氨酸残基和色氨酸残基的微环境变化一
4
T/K K a /(×10 L/mol) n R 2
致，进一步计算 2 种氨基酸残基的同步荧光猝灭率
298 4.3 0.63 0.989 4
（RSFQ），比 较 具 体 结 合 位 点 与 2 种 残 基 的 相 对
304 7.5 0.88 0.989 3
位置。
310 12.5 1.10 0.999 8
KNGP 对 COX-2 的 RSFQ 曲线如图 6 所示，在
表3 不同温度KNGP对COX-2的热力学参数 0.09、0.19、0.28、0.38 mmol/L4种浓度的情况下酪氨
Table 3 Thermodynamic parameters of KNGP on 酸的 RSFQ 值大于色氨酸的 RSFQ，说明酪氨酸残基
COX-2 at three temperatures
在 KNGP 引起 COX-2 的荧光猝灭中贡献较大。因
ΔH/ ΔS/ ΔG/
T/K 此，在与 COX-2的结合过程中，KNGP 结合位置可能
3
2
4
(×10 kJ/mol) [×10 J/（mol∙K）)] (×10 kJ/mol)
更接近酪氨酸。
298 / / -3.60
2.4 三维荧光光谱分析
304 6.85 2.42 -5.05
KNGP-COX-2配合物的三维荧光等高线图如图
310 / / -6.50
7 所示。峰 a 为瑞利散射峰（λ em =λ ex ），峰 1 为酪氨酸
荧光猝灭现象，且最大发射波长从 285.6 nm 蓝移到 和色氨酸残基的特征峰，峰 2 主要为 COX-2 中氨基
*
284.4 nm，表明加入 KNGP 使得 COX-2 的酪氨酸残 酸 π→ π 跃 迁 引 起 的 特 征 峰 。 如 图 7A、7B，对 于
基周围的疏水性增强，极性减弱。如图 5B 所示，色 COX-2，加入 KNGP 后峰 1 荧光强度从 335.8 下降到
氨酸残基的荧光强度降低，同样证实了荧光猝灭现 52.52，峰 位 置 发 生 了 约 10 nm 的 轻 微 蓝 移 ，表 明
象，其最大发射波长从 280.6 nm 蓝移到 279.2 nm，同 KNGP 与 COX-2 结合位点靠近酪氨酸残基，KNGP