Page 230 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2022年第5期

224 华 中 农 业 大 学 学 报 第 41 卷

3 000 多株突变株系等优势，广泛用于药物开发以及 1.2 GE 中姜辣素含量、总酚、总黄酮、总糖、总蛋
食品成分的生物活性及分子机制的研究 ［11］ 。此外， 白含量测定
基于线虫具有对外界环境变化敏感且能够作出快速 1）姜辣素含量测定。参照孔繁东等 ［15］ 的方法稍
的生理反应的特点，可以建立热应激研究模型 ［12］ 。 作修改。分别移取 250 μL 不同质量浓度（2、4、6、8、
HSR 是机体内重要的热应激应答保护机制，其基因 10、12、14、16 μg/mL）的香兰素标准溶液或稀释不同
在进化上高度保守。热休克因子 1（heat shock factor 倍数的样品溶液（溶于 DMSO）于 5 mL 容量瓶中，加
1，HSF-1/HSF1）是参与 HSR 的核心转录因子，且在 入无水乙醇定容至刻度，以无水乙醇为空白对照，在
线虫模型中被大量研究 ［13］ 。在高温刺激下，HSF-1 280 nm 处测定吸光度值。姜辣素含量计算时需乘以
可直接被激活 ［14］ ，启动下游热休克蛋白（heat shock 香兰素与姜辣素间的换算系数2.003。
proteins，HSPs）的快速表达。HSPs 作为分子伴侣 2）总酚含量测定。采用福林-酚法 ［16］ 。分别移
可以协助蛋白质重新折叠，促进受损蛋白质降解， 取 100 μL 不同质量浓度（0、75、125、175、250、325、
恢 复 蛋 白 质 稳 态 ，增 强 机 体 对 热 应 激 的 抵 抗 375、450 μg/mL）的没食子酸标准溶液或稀释不同倍
能力 ［13］ 。 数的样品溶液（溶于 DMSO）于 2 mL 离心管中，依次
因此，本研究采用秀丽隐杆线虫模型，从生姜提 加入 150 μL 的超纯水、250 μL 98% 福林酚后摇匀，
取物调节 HSR的角度探究其对机体应答热应激的作 再加入 375 μL 5% 碳酸钠溶液、超纯水 1 125 μL，摇
用机制，旨在进一步为生姜提取物缓解热胁迫提供 匀，静置60 min，于765 nm处测定吸光值。
一定的理论依据。 3）总黄酮含量测定。采用亚硝酸钠-三氯化铝
法 ［17］ 。分别吸取 400 μL 不同质量浓度（0、40、80、
1 材料与方法
160、240、320、400、480、560 μg/mL）的芦丁标准溶液
1.1 材料、试剂及试验株系 或稀释不同倍数的样品溶液（溶于 DMSO）于 2 mL
生姜（乙醇）提取物（ginger extract，GE）购自西 离 心 管 中 ，加 入 80 μL 5% NaNO 2 ，摇 匀 后 静 置 6
安 赛 邦 生 物 科 技 有 限 公 司 ，生 产 批 号 为 XASB⁃ min，再加入 80 μL 10% 的 AlCl 3 ，摇匀后静置 6 min，
SJ200825，生产日期为2020年8月25日。 加入 0.8 mL 10% NaOH 溶液，加 640 μL 50% 乙醇，
一水合柠檬酸、一水合柠檬酸钾、EDTA、七水 摇匀，静置15 min，于510 nm处测定吸光度值。
合硫酸亚铁、四水合氯化锰、七水合硫酸锌、五水合 4）总糖含量测定。采用苯酚-硫酸法 ［18］ 。分别
硫酸铜、十二水合磷酸氢二钠、氯化钠、磷酸二氢钾、 将不同质量浓度（0、20、40、80、100、120、160、200
磷酸氢二钾、无水氯化钙、七水合硫酸镁、氢氧化钠、 μg/mL）的葡萄糖标准溶液或稀释不同倍数的样品
次氯酸钠、无水乙醇、胆固醇、98% 福林酚、葡萄糖、 溶液（溶于 DMSO）放入 5 mL 离心管，并加入超纯
苯酚、浓硫酸、碳酸钠、亚硝酸钠、三氯化铝，国药集 水、6% 苯酚、浓硫酸以体积比 1∶1∶1∶5 混合均匀，冷
团化学试剂有限公司；没食子酸、香兰素、芦丁、考马 却静置20 min，于490 nm处测定吸光度值。
斯亮蓝、牛血清白蛋白，上海源叶生物科技有限公 5）总蛋白含量测定。采用考马斯亮蓝法 ［18］ 。
司；二甲亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO），上海鼎国 分别将不同质量浓度（0、10、20、40、60、100、140、
生物科技有限公司；总 RNA 提 取 试 剂 盒 ，北 京 艾 180 μg/mL）的牛血清白蛋白标准溶液或稀释不同倍
德 莱 生 物 科 技 有 限 公 司 ；cDNA 反 转 录 试 剂 盒 、 数的样品溶液（溶于 DMSO）放入 5 mL 离心管，并加
qPCR 试 剂 盒 SYBR® Premix Ex Taq™，日 本 Ta⁃ 入考马斯亮蓝溶液以体积比1∶5混合均匀，于595 nm
KaRa Bio 株式会社；正反引物，北京擎科生物科技 处测定吸光度值。
有限公司。 1.3 秀丽隐杆线虫培养
野 生 型 线 虫 株 系 N2 和 CL2070［（dvls70） 试验所用线虫的传代和同步化过程以及缓冲液
hsp16.2：：GFP］购自美国明尼苏达大学秀丽隐杆线 和 培 养 基 的 配 制 ，参 考 WormBook（http：//www.
虫 遗 传 学 中 心（Caenorhabditis Genetics Center， wormbook.org/）。
CGC）。 大 肠 埃 希 氏 菌 OP50（E. coli OP50）和 1）试验所用线虫株系的传代。将所用的株系从
PS3551［hsf-1（sy441）Ⅰ］由西南医科大学罗怀荣教 已有大量线虫的线虫生长培养基（nematode growth
授惠赠。 medium，NGM）固体平板中切块转移到已涂布 E. co⁃