Page 224 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2022年第5期

218 华 中 农 业 大 学 学 报 第 41 卷

图2 基于18S rDNA序列的系统发育进化树
Fig. 2 Phylogenetic tree based on 18S rDNA sequences of selected strains

图 A中 1为胶体壳聚糖，2为粉末壳聚糖，3为胶体几丁质，4为粉末几丁质，5为胶体壳聚糖+葡萄糖，6为胶体壳聚糖+蔗糖，7为胶体壳
聚糖+可溶性淀粉，8 为葡萄糖，9 为蔗糖，10 为可溶性淀粉。In Fig. A，1：Colloidal chitosan；2：Powder chitosan；3：Colloidal chitin；
4：Powder chitin；5：Colloidal chitosan glucose；6：Sucrose；7：Colloidal chitosan soluble starch；8：Glucose；9 ：Sucrose；10：Soluble starch.
图3 碳源（A）、氮源（B）、麸皮豆粕质量比（C）、接种量（D）、起始pH（E）、发酵温度（F）对溜曲霉M3b产壳聚糖酶的影响
Fig.3 Effect of carbon sources（A），nitrogen sources（B），bran soybean meal ratio（C），inoculation amount（D），
pH（E），and temperature（F）on chitosanase production by Aspergillus tamarii M3b

在最佳碳氮源的基础上，改变麸皮豆粕的质量 如图 3F 所示，当发酵培养温度为 32 ℃时，菌株
比，结果如图 3C 所示，麸皮与豆粕的质量比为 6∶10， M3b 所产壳聚糖酶的酶活力最高为 19.88 U/mL，是
菌株M3b产酶活力最高为13.56 U/mL。 初始固体发酵培养的 215.2%。当温度为 27 ℃和
接种不同量的液体发酵液培养发酵，结果如图 37 ℃时，菌株仍保持较高的产酶能力，分别为最高值
3D 所示，当接种液体发酵液的量为 3 mL 时，溜曲霉 的 89.5% 和 87.9%，当温度高于 47 ℃时，菌株 M3b产
菌株M3b产壳聚糖酶活力最高，为13.68 U/mL。 酶量明显下降。在一定范围内，生物生长的速率以
由图 3E 可见，当培养基的初始 pH 为 7.0 时，溜 及化学反应速率在细胞中都随着温度的升高而加
曲霉 M3b 所产酶活力最高为 17.48 U/mL。当液体 快。超出一定的范围，生物机体的重要组成部分，如

培养基 B 液初始 pH 在 6.0~8.0时，溜曲霉 M3b受 pH 蛋白质、核酸等，会发生不可逆的破坏。
影响不大，都保持在较高产壳聚糖酶水平，分别达到 固体发酵时间对溜曲霉 M3b 产壳聚糖酶的影响
最高值的 92.3% 和 76.9%。当液体培养基 B 液初始 见图 4，可以发现发酵到第 6 天时，菌株 M3b 产酶活
pH 低于 3.0 时，溜曲霉 M3b 所产壳聚糖酶的活力迅 力最高为 16.0 U/mL。发酵第 1 天固体培养基中没
速降低，一般真菌菌株最适合生长的 pH 值在 5.0~ 有明显的菌落生长，第2天可以观察到白色菌丝，第3
8.0。因此，以pH 7.0为最佳初始pH。 天后出现黄棕色孢子，第 6、7 天后，菌株开始呈现褐